抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备及测定

猪屠宰后,立刻取其背部皮下脂肪组织在37℃膜萃取液中匀浆,用差速离心法和密度梯度离心法提取脂肪细胞膜蛋白,经SDS-PAGE分析,背部脂肪细胞膜蛋白与其他组织细胞膜蛋白具有较大差异,但也有一些相同的膜蛋白.以猪背部脂肪细胞膜蛋白为抗原,免疫雄性家兔,制备抗猪脂肪细胞膜蛋白血清,经酶联免疫反应(ELISA)测定,血清效价达到1:12800.同样,用ELISA和Western-blotting测定抗体与其他组织细胞膜的交叉反应,结果显示:抗猪脂肪细胞膜抗体与其他组织细胞膜有交叉反应,但反应性不高.     

猪树突状细胞的体外扩增

树突状细胞(DC)是一类专职的抗原提呈细胞,在激发机体初始免疫反应和调节T细胞介导的免疫反应中都发挥十分重要的作用,但至今对猪DC的了解较少.本研究从猪外周血中分离获得单核细胞,分别加入150ng/mLpGM-CSF和100U/mL pIL-4,体外培养6 d后诱导出大量DC,通过显微镜观察可见其细胞表面具有典型的树突状突起,呈毛刺状.猪DC的体外获得将为进一步研究许多病毒性疾病的致病机理奠定坚实的基础.     

活性炭吸附法固定猪胰脂酶的初步研究

初步研究了以活性炭为载体的猪胰脂酶吸附固定，吸附pH和吸附量对吸附固定有重要影响，吸附的最适pH在8左右，酶的比活随吸附量的增加而减小，同时固定化酶有比自由酶更好的热稳定性。     

分离方法和卵巢发育状况对猪腔前卵泡分离及体外培养的影响

以直径在200～300μm的腔前卵泡为研究对象，研究了不同分离方法及卵巢不同发育状况对猪腔前卵泡分离及体外培养的影响。结果表明，显微分离法每个卵巢可采集的卵泡数极显著高于剪碎过滤法（24．75±2．99vs2．60±0．35，P〈0．01），显微分离法分离每个腔前卵泡所用的时间极显著低于剪碎过滤法（5．40±0．44vs15．52±1．18，P〈0．01）；有黄体和无黄体的卵巢对卵泡分离的影响差异不显著（26．10±2．02vs24．35±2．32，P〈0．05），但有黄体的卵巢分离的卵泡数稍多于无黄体的卵巢。此外，对两种分离方法分离出的腔前卵泡进行培养研究表明，两种分离方法对卵泡体外生长和存活，以及正常卵母细胞比率均没有显著影响（P〉0．05）。     

Sources of cumulus expansion enabling factor (CEEF) in porcine follicles

It was shown that expansion of porcine cumulus did not depend on oocyte-secreted factor(s), and it is therefore presumed that porcine CEEF may not be produced exclusively by the oocyte. In this experiment, we used mouse oocytectomized complexes (OOX), which were incapable of CEEF production, to assess the secretion of CEEF by evacuated zona, oocytes of different quality and somatic cells in the porcine follicles. The results showed that: (ⅰ) Evacuated zonae from both porcine and mouse oocytes did not produce CEEF. (ⅱ) Porcine oocytes of A, B and C types from 3—6 mm follicles were not significantly different in both production and activity of CEEF. (ⅲ) Both porcine OOX from 3—6 mm follicles and granulose cells from < 1 mm follicles secreted CEEF in a large quantity, independent of gonadotropins; mural granulose cells from 3—6 mm follicles, however, produced neglectable amount of CEEF. (ⅳ) The follicular fluid from 3—6 mm porcine follicles contained CEEF activity that was concentration-dependent, and thus it enabled cumulus expansion in 60% mouse OOX when used at 10% of concentration, but the expansion rate of mouse OOX decreased to 9% when the concentration was increased to 50%. (ⅴ) Mouse OOX cultured in porcine CEEF-containing M199 expanded only in the presence of gonadotropins, suggesting that the activity of porcine CEEF is hormone-dependent.     

猪血清胸腺因子免疫活性的测定

根据哺乳动物循环血液中所含有的血清胸腺因子(STF)能使θ-阴性的玫瑰花瓣状形成细胞(RFC~-)转变成RFC~+,同时提高其对抗θ抗原血清的代用品硫唑嘌呤的敏感性的原理,采用成熟的BALB/C品系小鼠,经摘去胸腺后的鼠脾脏淋巴细胞和绵羊红细胞(SRBC)之间,在STF和硫唑嘌呤同时共存的条件下具有抑制玫瑰花结形成的作用,从而建立了对哺乳动物循环血液中的STF(九肽)的超微量生物活性测定方法。用本方法对猪血清和血浆的检测结果,其活性滴度分别为1:512、1:1024。     

猪血浆巯基蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

用(NH_4)_2SO_4分段盐析,DEAE-纤维素离子交换和Papain—Sepharose亲和层析,从猪血浆纯化了一种巯基蛋白酶抑制剂(SUlfhydryl proteinase inhibitor;简称SPI);纯化倍数为54.36倍.经高pH、低PH不连续电泳呈一条区带.含糖量为7.77％;PI为4.80.氨基酸组成分析表明,猪血SPI富含酸性氨基酸、芳香族氨基酸和含硫氨基酸.用SDS-PAGE和SephadexG-100层析,测得分子量为130000d和131000d,由两个分子量略有差别的亚基组成.对木瓜蛋白酶有强烈抑制作用,对胰蛋白酶无作用。α-螺旋结构含量高。     

猪血血活素的制备和性能

以猪血为材料,运用热变性和乙醇除杂蛋白,再经过旋转蒸发、离子交换、活性炭脱色、浓缩得到血活素产品,并对产品进行了性能分析。结果表明:该产品已基本无大分子蛋白,干物质含量在25.6 mg/mL。微量金属含量为铜0.04 mg/mL、锌0.003 2 mg/mL、铁0.4μg/mL。运用该产品代替小牛血清培养细胞,细胞生长较明显,虽然与小牛血清培养效果存在差距,但可看出该产品在细胞培养方面具有潜在的开发前途。     

猪细小病毒分子生物学诊断技术的研究进展

猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一。它广泛分布于世界各地,给我国乃至全世界的养猪业造成了巨大的经济损失。近年来,猪细小病毒的分子生物学诊断方法的研究进展迅速,为猪细小病毒的快速、准确的诊断起到了重要的作用。从聚合酶链式反应技术、核酸探针技术、DNA芯片技术等方面对猪细小病毒的分子生物学诊断技术进行综述有助于我们进一步了解这项技术。     

自由和固定化猪胰脂肪酶在有机相中催化丁酸甲酯和四氢糠醇的酯交换反应

本文用自由和聚苯乙烯载体固定化猪胰脂肪酶在有机相中催化丁酸甲醋和四氢糠醇的酯交换反应．研究了不同有机溶剂、底物浓度、含水量、加酶量、温度及振荡速度等对反应的影响，对比了酶固定化前后的催化性能．结果表明，用疏水性交联聚苯乙烯载体固定化猪胰脂肪酸能减少扩散限制，固定化酶在有机相中催化活性比自由酶高约２５％．